检测牛感染犬新孢子虫的TaqMan-MGB Real-time PCR方法的建立

摘要：

为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法.PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108％,组间为2.732％;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100％(46/46).该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫.

关键词：新孢子虫病、Real-time PCR、3D数字PCR、TaqMan-MGB探针、Nc2基因

所属期刊栏目：21

分类号：S858.23;S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：新疆维吾尔自治区科技成果转化专项项目201454129;巴音郭楞蒙古自治州科学技术研究“星火”项目201403;库尔勒市重点科技计划项目2013051108

在线出版日期：2016-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：58-64