葡萄卷叶伴随病毒2号p24蛋白基因转化烟草的研究

摘要：

以含有葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)p24蛋白基因的T载体(p-G2-p24)为模板,PCR扩增该蛋白基因的全长序列及其5′端长300 bp的正反向片段.将p24蛋白基因全长序列定向克隆到表达载体pCsuper 1300+上,得到重组质粒pCsuper1300-p24.将正反向片段先后插入具内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-p24-F-R.然后用HindⅢ和Sac Ⅰ双酶切pBSint-p24-F-R,将切下的带内含子的正反向串联片段定向克隆到植物表达载体pCsuper 1300+上,得到含有发夹结构的RNAi重组质粒pCsuper-p24 F-R.将pSuper1300-p24和pCsuper-p24-F-R分别通过农杆菌浸润叶盘法转化本生烟.经过RT-PCR和PCR检测,分别获得了异源表达p24的T0和T1代阳性株系各34和12个,转化pCsuper-p24-F-R的T0和T1代阳性株系各17和7个.该结果可为p24功能研究及培育RNAi介导的抗病毒葡萄新种质提供试验材料.

关键词：葡萄、异源表达、RNA干扰、RNA沉默抑制子

所属期刊栏目：18

分类号：S663.1(果树园艺)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项CARS-30-bc-1

在线出版日期：2014-01-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：138-142