猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要：

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法.根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核表壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因.将其克隆到PET-30a构成原核表达裁体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达.通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性.以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法.试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应.本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、核衣壳蛋白、ORF7基因、ELISA

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划2006BAD06A14;实验用小型猪地方标准研究项目D07080200720701

在线出版日期：2009-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：5-10