水稻OsAAA1基因超表达载体构建及遗传转化

摘要：

为了构建带Flag标签的OsAAA1超表达载体,获得阳性转基因植株并分析其OsAAA1基因表达情况.以日本晴的cDNA为模板,将OsAAA1克隆至pU1301-Flag载体;重组质粒通过PCR、酶切及测序鉴定正确后,以农杆菌为介导进行遗传转化至日本晴;转基因植株通过分子鉴定正确后,采用Real-time PCR检测OsAAA1基因的mRNA表达水平变化.成功构建了OsAAA1-pU1301-Flag重组载体;遗传转化后获得33株转基因植株;通过分子鉴定筛选出26株阳性转基因植株;荧光定量PCR结果分析发现23株阳性转基因植株OsAAA1基因的表达出现不同程度上调.与日本晴相比,有8株表达量达到30倍以上,其中有5株表达量超过40倍.成功构建了带Flag标签的OsAAA1超表达载体;遗传转化结果表明OsAAA1-Flag能整合到日本晴的基因组DNA中,从而使OsAAA1基因的表达水平增加.本研究为后续通过Flag标签,在水稻植物体内直接挖掘与OsAAA1互作的功能蛋白奠定了基础.

关键词：水稻、OsAAA1基因、pU1301-Flag载体、遗传转化、分子鉴定

所属期刊栏目：36

分类号：S511(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金面上项目“水杨酸应答新基因OsAAA-ATPase-1在水稻广谱抗病反应中的分子机理研究”31370306

在线出版日期：2020-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：91-96