转TLR4基因的绵羊胎儿成纤维细胞系的建立
为了通过脂质体介导的方法获得高效表达目的基因TLR4的绵羊胎儿成纤维细胞作为供体细胞,以便在胚胎移植前的体外筛选过程中确定优越的转基因供体细胞,从而提高体细胞核移植生产抗病转基因绵羊的效率.本研究通过优化脂质体与质粒载体的比例浓度,进而再去转染原代培养的绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选,以EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)作为报告基因,从形态学与分子水平鉴定出已经稳定表达目的基因:Toll样受体4(Toll Like Receptor4,TLR4)基因的细胞系.最终经过筛选与纯化得到3个表达目的基因TLR4的细胞克隆,经RT-PCR与相对荧光定量PCR分析,在第二代转染的细胞中TLR4的表达最高,相对于未转染的绵羊胎儿成纤维细胞升高了9.65倍(P＜0.01),并藉此为最终制备抗病转基因羊新品种,从提供稳定表达TLR4基因的转基因供体细胞系角度奠定基础.
绵羊、TLR4、胎儿成纤维细胞系、转基因克隆
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S813.3(普通畜牧学)
2012年度国家科技重大专项“转基因生物新品种培育”一级子课题“抗病转基因羊扩繁体系初步建立”研究2011ZX08008005-003;北京市教委北京市属高等学校创新团队建设与教师职业发展计划项目“体细胞转基因克隆肉牛新品系培育与利用”IDHT 20130515
2014-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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