花椰菜的ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

以花椰菜基因组为材料,通过单因素试验,对ISSR-PCR反应体系中各种影响因子如dNTPs浓度,DNA模板含量,Taq DNA聚合酶量,引物用量以及最适退火温度等进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR-PCR反应体系:25μL反应体积:内含10×PCR反应缓冲液(含Mg2+)2.5μ、0.5U TaqDNA聚合酶、0.2mmol/LdNTPs、0.5μmol/L引物、60ng模板DNA.确定了适宜的退火温度为48.6℃.扩增程序为94℃预变性5 min;然后94℃变性30s,46.9℃退火45 S,65℃延伸1.5min,35个循环;最后65℃延伸7min,4℃保存.用120条引物对花椰菜基因组进行标记,筛选出引物TI-13可以将这6份花椰菜材料区分开.花椰菜ISSR反应体系的建立为利用ISSR标记技术进行花椰菜品种鉴别、分类、种质资源遗传多样性分析奠定了良好基础.

关键词：花椰菜、ISSR反应体系、优化

所属期刊栏目：26

分类号：S635.3(蔬菜园艺)

资助基金：甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2007-20

在线出版日期：2010-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：27-31