牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体双重PCR检测方法的建立及应用

摘要：

参照GenBank中牛多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列（AF016259）和牛支原体oppD/F基因序列（AF130119），设计两对引物，在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上，优化双重PCR反应条件，建立了两种细菌的双重PCR检测方法，用这两对引物对同一样品中的牛多杀性巴氏杆菌、牛支原体核酸为模板进行双重PCR扩增，结果可同时扩增牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的265bp和439bp的特异性片段，而对其他4种牛病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，对牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的最低核酸检出限均为1pg。通过对30份临床病料检测，将建立的双重PCR技术和单项PCR方法进行对比验证，结果显示，两者的总符合率为100%。结果表明，建立的双重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点，可用于对牛多杀性巴氏杆菌和牛支原体的同时检测和鉴别诊断。

关键词：牛多杀性巴氏杆菌、牛支原体、双重PCR、检测

分类号：S858.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省现代产业技术体系牛创新团队项目SDAIT-12-011-12。

在线出版日期：2015-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：19-22