牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌多重PCR快速检测方法的建立

摘要：

本试验旨在建立一种可同时鉴别牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌的多重PCR方法。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyac-hvaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16SrRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物，多重PCR的最佳扩增条件确定为：95℃ 10min预变性；95℃ 1min，56℃ 50s，72℃ 1min，循环30次；72℃ 210min延伸。结果表明，该多重PCR方法可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段，不能扩增出其他病原菌的相关片段；对多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低检测浓度分别为8×10^5CFU／mL、8×10^5CFU／mL和4×10^6CFU／mL。同时用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织，发现12h预增菌后，肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92％。对临床样本进行牛支原体分离培养需要3-4d时间，而采用多重PCR方法检测12h预增菌则能在24h内出结果。该多重PCR方法显著加快了临床诊断速度，具有推广应用价值。

关键词：多重PCR、牛支原体、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌、牛呼吸疾病综合征

分类号：S858.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业公益性行业科研专项201003060;现代农业肉牛牦牛产业技术体系CARS-38专项资金

在线出版日期：2013-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：4-9