基于结核菌素与CFP10/ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究

摘要：

本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核茵特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景.无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝.每1mL全血与1mLRPMI 1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA) CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL (2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜.次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度.结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84.但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性.相关系数为-0.11.分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应.以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头.扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54.结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高.当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛.而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆茵的影响,检测具有良好的特异性与敏感性.

关键词：牛结核、IFN-γ、牛结核菌素、CFP10、ESAT6、禽结核菌素

分类号：S855.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家973项目2006CB504400:国家"十一"科技攻关奶业重大专项2006BAD04A05,2006BAD04A12;武汉市科技攻关课题20066002056

在线出版日期：2008-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：12-14