柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建

摘要：

以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600 bp、含钙离子结 合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合.设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上；经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株.将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pFGC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体.将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达.

关键词：柑桔、钙离子结合蛋白基因、基因克隆、遗传转化

所属期刊栏目：41

分类号：Q785;S666(基因工程（遗传工程）)

资助基金：重庆市科技攻关计划项目CSTTC,2007AA1018;现代农业柑桔产业技术体系建设专项资助

在线出版日期：2012-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11