海带属配子体DNA提取及ISSR-PCR体系优化

摘要：

为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化.结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20 μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 UTaq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min; 95℃变性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2min,共38个循环;最后72℃延伸10 min.在优化的海带ISSR反应条件下,扩增条带稳定,重现性好,为应用ISSR分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础.

关键词：海带属、配子体、DNA提取、ISSR、体系优化

所属期刊栏目：4

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：国家科技支撑计划“海藻栽培新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”2012BAD55G01;国家863重大项目“基于全基因组信息的藻类遗传选育”2012AA10A406;烟台市科技发展计划项目“药用和食用海藻新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”2013LGS002

在线出版日期：2015-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：80-84