巨噬细胞RAW264.7通过TLR4-NF-κB信号通路调控流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的实验研究

摘要：

目的:检测巨噬细胞RAW264.7对H1N1型流感病毒增殖的抑制作用,初步探讨固有免疫细胞抗病毒的作用机制.方法:采用10 TCID50、100 TCID50和1000 TCID50低、中、高剂量流感病毒A/PR/8/34(PR8,H1N1)感染RAW264.7细胞,光学显微镜和Hoechst染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率,qPCR和流式细胞术检测Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平,免疫荧光染色对细胞Influenza NP、TLR4和NF-κB p65表达进行定位,qPCR和ELISA检测IL-6、TNF-α和IFN-β水平.结果:与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组细胞凋亡率显著提高(P<0.01);qPCR、流式细胞术和免疫荧光染色显示,与对照组比较,RAW264.7细胞感染PR8后Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平显著提高(P<0.01),与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组三者表达不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID50组TLR4和NF-κB p65上调幅度大于100 TCID50组(P<0.05);细胞感染PR8后IL-6、TNF-α和IFN-βmRNA水平和培养液各因子浓度较对照组显著升高(P<0.01),与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组各因子水平不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID50组较100 TCID50组显著升高(P<0.01).感染剂量与细胞凋亡率(FCM)和NP(FCM)、TLR4(FCM)、NF-κB p65(FCM)、IL-6、TNF-α和IFN-β(qPCR)水平呈正相关(r=0.634,P=0.002;r=0.747,P<0.001;r=0.812,P<0.001;r=0.790,P<0.001;r=0.805,P<0.001;r=0.874,P<0.001;r=0.863,P<0.001).结论:巨噬细胞RAW264.7通过上调TLR4-NF-κB信号通路诱导下游炎症因子表达,发挥抗病毒增殖效应.

关键词：RAW264.7、流感病毒、固有免疫、TLR4、NF-κB

所属期刊栏目：38

分类号：R392.9

资助基金：辽宁省博士科研启动基金计划项目2020-BS-246

在线出版日期：2022-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1557-1563