变形链球菌gtfS、gbpB基因的串联表达及其卵黄抗体的制备

摘要：

目的:串联表达变形链球菌毒力基因gtfS、gbpB的重组融合蛋白,将其作为免疫抗原制备特异性卵黄抗体,并研究该卵黄抗体的免疫活性.方法:以变形链球菌标准菌株UA159的基因组为模板,通过PCR方法扩增gtfS的CAT区和gbpB的SYI区,以SOE-PCR方法将其串联成基因片段CAT-SYI.在限制性内切酶EcoRⅠ-HF和XhoⅠ及T4 DNA连接酶的作用下构建重组质粒pET32a-CAT-SYI,转化表达菌株E.coli BL21,用1 mmol/L IPTG诱导表达后超声破碎重组菌,将提取纯化的重组融合蛋白免疫产蛋鸡并从鸡蛋中提取卵黄抗体,利用ELISA、Western blot和斑点杂交分析该抗体的特异性和免疫活性.结果:经PCR、SOE-PCR成功扩增出约750 bp的串联基因CAT-SYI,SDS-PAGE检测结果表明其表达产物约50 kD,与目的蛋白大小符合.ELISA间接法测得卵黄抗体的效价可达1:100000以上,Western blot鉴定结果显示IgY的特异性,在相对分子量约为35 kD和70 kD处出现相应的条带,斑点杂交检测结果显示特异性卵黄抗体具有识别变形链球菌的能力.结论:制备的特异性卵黄抗体具有良好的抗变形链球菌免疫活性,为免疫防龋奠定了基础.

关键词：变形链球菌、串联表达、卵黄抗体、免疫活性

所属期刊栏目：35

分类号：R780.2(口腔科学)

资助基金：四川省教育厅重点项目12ZA088

在线出版日期：2019-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：711-716