柯萨奇病毒B组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备

摘要：

目的:原核表达柯萨奇病毒B组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测.方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒B组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白.用HisTrap HP亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化的目的蛋白为抗原,免疫雄性SD大鼠获得VP1蛋白多克隆抗体血清,ELISA测定该抗体的效价,微量中和实验测定抗体的中和活性,Western blot检测抗体的特异性,免疫组化检测抗体对组织中抗原的识别.结果:成功构建了VP1-pET-28a重组载体,并且在BL21细胞中成功诱导表达,亲和层析柱纯化后蛋白纯度大于90％.ELISA测得抗体的效价为1:128000,微量中和实验显示抗体没有中和活性,Western blot分析显示抗体能与CVA16和EV71交叉反应,免疫组化实验表明抗体能够识别组织中的CVB5抗原.结论:本研究成功制备了CVB5 VP1蛋白的高效价的多克隆抗体,为CVB5病毒疫苗和病毒诊断的研发提供了有效的工具.

关键词：柯萨奇病毒B组5型、VP1蛋白、多克隆抗体、免疫组化

所属期刊栏目：35

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：病毒学国家重点实验室开放研究基金资助项目208KF006;昆明理工大学208 年学生课外学术科技创新基金课题208BA3

在线出版日期：2019-04-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：463-466