DENV-2诱导HUVECs自噬和影响细胞活力的研究

摘要：

目的:通过利用登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,研究病毒诱导HUVECs产生自噬和对细胞活力的影响.方法:利用DENV-2 NGC株感染HUVECs,Real-time PCR检测HUVECs中DENV-2 NS1基因部分系列的表达,给予自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)和自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理观察细胞自噬通量变化,激光共聚焦显微镜观察自噬体形成;CCK-8检测细胞活力;Western blot检测自噬通量标志性蛋白LC3、P62的蛋白表达量.结果:DENV-2感染HUVECs组病毒NS1基因在各时间点均有表达;被感染的HUVECs在24 h时细胞活力下降不明显,36、48 h细胞活力分别下降至未处理组82.46%和78.47%,差异具有显著统计学意义(P<0.05);HUVECs被DENV-2感染后,LC3-Ⅱ蛋白量表达明显增高,自噬底物P62表达明显降低,36、48 h时间点相较未处理组具有统计学意义(P<0.05),与RAPA处理组结果相似(P>0.05).CQ处理组LC3-Ⅱ及P62蛋白量表达均明显升高,36、48 h时间点相较未处理组具有显著性差异(P<0.05).HUVECs被DENV-2感染36 h,激光共聚焦显微镜观察到LC3-Ⅱ表达明显高于未处理组,自噬诱导剂RAPA处理HUVECs后,LC3-Ⅱ表达明显增加,自噬强度更加明显.DENV-2与CQ联合处理组相较DENV单独处理组,36 h细胞活力下降了13.61%,差异具有显著统计学意义(P<0.05).结论:DENV-2感染可抑制HUVECs的生长;而DENV-2诱导HUVECs产生的自噬却有利于HUVECs的存活.

关键词：登革病毒、人脐静脉内皮细胞、自噬、细胞活力

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分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金项目81560263;贵州省教育厅"125"重大科技专项[黔教合重大专项字2012008号]和贵州省优秀科技教育人才省长专项[黔省专合字200982号]资助

在线出版日期：2018-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1131-1136