稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定

摘要：

目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型.方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD.利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果.结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显.结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具.

关键词：NLRP3炎性体、巨噬细胞、基因敲低、shRNA

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分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金项目81573723;北京中医药大学基本科研业务费项目2016-JYB-JSMS-004

在线出版日期：2018-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：398-402