抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测

摘要：

目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(scFv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用.方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体 pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot 鉴定;间接ELISA 和流式分析技术进行特异性鉴定.利用MTT法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析.结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长.结论:成功构建了基于抗B7-H4单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性.

关键词：B7-H4、单链抗体、绿脓杆菌外毒素PE38KDEL、重组免疫毒素、靶向治疗

所属期刊栏目：34

分类号：R392.11

资助基金：江苏省教育厅自然科学基金K11100BY1103

在线出版日期：2018-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：354-361,366