10.3969/j.issn.1000-484X.2016.06.014
FILIP-1 L 蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
目的:表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白,制备FILIP-1L多克隆抗体。方法:pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化E. coliBL21大肠杆菌,IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达,Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备FILIP-1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价,Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果:在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白,经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔,获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体,WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论:成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。
FILIP-1L、融合蛋白、多克隆抗体
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R392
国家自然科学基金资助项目No.30971508。
2016-06-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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