10.3969/j.issn.1000-484X.2016.04.018
金黄色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表达
目的:表达纯化可溶性金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)作为抗原,用以后期制备全人源抗α-HL抗体,为金黄色葡萄球菌感染提供新的治疗手段。方法:提取金黄色葡萄球菌总RNA,经反转录聚合酶链反应( RT-PCR)技术,扩增α-HL cDNA,将cDNA双酶切后与载体pCold-TF连接,转化E.coli TOPO 10,菌落PCR及测序验证插入基因的正确性。将测序正确的α-HL/pCold-TF重组质粒转化E.coli BL21进行低温诱导表达,SDS-PAGE和Western blot验证表达产物的正确性。结果:PCR扩增得到的α-HL基因大小为900 bp左右;将重组质粒α-HL/pCold-TF转化E.coli BL21,经15℃低温诱导表达24 h ,诱导得到可溶性的α-HL融合蛋白,融合蛋白大小为90 kD左右(载体上的TF 分子伴侣大小为45 kD左右);经Western blot 验证表达纯化的蛋白为α-HL融合蛋白。将纯化的α-HL蛋白注射BABL/c小鼠制备抗血清,结果显示抗血清与金黄色葡萄球菌结合良好,效价大于10000倍。结论:成功对α-HL进行了基因克隆,并成功表达纯化到可溶性的α-HL融合蛋白。
金黄色葡萄球菌、α-HL、可溶性表达
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R392.11
四川省科技厅项目LY-96,013SZZ005;泸州市科技局项目2013LZLY-K77。
2016-05-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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