IRF3基因干扰对LPS刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响

摘要：

目的：探讨干扰素调节因子3（Interferon regulator factor 3，IRF3）shRNA腺病毒对脂多糖（Lipopolysaccharide， LPS）刺激枯否细胞（Kupffer cell，KC）早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法：采用在体灌注分离培养大鼠原代KC，以IRF3 shRNA腺病毒体外感染KC，48 h后采用LPS刺激细胞，于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液，并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析；细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果：LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高，IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达；KC受LPS刺激活化后极早期（2 h）IFN-β分泌即上升，4 h达峰值，6 h分泌水平开始下降，但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌，抑制分泌高峰的出现，并使6 h分泌水平趋于正常；KC活化后极早期即分泌大量TNF-α，并于2 h内达到峰值，随后分泌逐渐下降，但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌，并抑制了分泌高峰的出现；IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后，6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌；KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升，且随着LPS刺激时间延长，其分泌水平逐渐增加。 IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论：IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默；在LPS刺激原代KC，IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌，并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此，IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。

关键词：原代枯否细胞、干扰素调节因子3、基因干扰、固有免疫、炎性反应

所属期刊栏目：32

分类号：R575.3(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金项目81070357，30660066;上海市松江区科学技术攻关项目14SJGGYY22。

在线出版日期：2016-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：470-475,479