COMP特异性单抗15 A11的表位特征研究

摘要：

目的：鉴定RA相关自身抗原COMP的一株特异性单克隆抗体15A11的表位特征。方法：选用随机十二肽噬菌体库对mAb 15A11进行三轮筛选，随机挑取40个单噬菌斑，提取DNA，测序；ELISA检测每个噬菌体克隆与mAb 15A11结合的特异性；通过ClustalW2对特异性结合的噬菌体展示的十二肽和COMP进行氨基酸序列比对，PyMOL分析一致氨基酸所在肽链的二级结构及表位氨基酸之间的距离，初步确定mAb 15A11的表位；变性和非变性Western blot、EDTA螯合Ca2＋后ELISA分析以及合成多肽的ELISA实验进一步确定表位序列。结果：得到的40个测序噬菌体中，共有5个噬菌体克隆，ELISA确定克隆1和克隆2与mAb 15A11特异性结合，其他克隆均为非特异性结合的噬菌体；氨基酸序列比对，在COMP上未发现与克隆1和克隆2噬菌体相同的连续氨基酸序列，提示mAb 15A11的抗原表位可能为非线性表位；PyMOL分析表位氨基酸在COMP上的定位及距离，显示构象表位的合理性；变性Western blot分析为阴性，而非变性Western blot条件下为阳性；EDTA螯合Ca2＋破坏COMP的构象后不能与mAb 15A11结合，而未经处理的与mAb 15A11结合，均说明mAb 15A11表位是构象表位；合成多肽与mAb 15A11的ELISA结果进一步确定了mAb 15A11的构象表位序列。结论：鉴定了mAb 15A11的表位是构象表位序列，且确定了该构象表位的氨基酸组成，为研究COMP抗体与抗原反应机制具有重要理论价值，并对类风湿性关节炎的检测有重要应用意义。

关键词：COMP、单克隆抗体、类风湿性关节炎、噬菌体展示技术、表位

分类号：R392.11

资助基金：湖北省自然科学基金重点项目2014CFA079;国家自然科学基金No.30972693，21473065资助。

在线出版日期：2015-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1465-1471