10.3969/j.issn.1000-484X.2015.09.016
多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备
目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子( CDNF )蛋白并制备 CDNF 多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:构建的pVR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达,镍柱亲和层析获得纯度90%以上的CDNF蛋白, MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后,成功制备出CDNF 多克隆抗体。结论:通过HEK293 T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白,并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。
CDNF、多克隆抗体、镍柱亲和层析、帕金森病
R392-33
国家自然科学基金项目31300756,81472816;吉林省科技发展计划青年科研基金项目20140520007JH资助。
2015-09-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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