免疫沉淀分析抗人DR5单克隆抗体激活白血病细胞caspase8/10

摘要：

目的:分析抗人死亡受体5(death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6对白血病细胞系Jurkat及U937细胞caspase8、caspase10激活变化.方法:采用Western blot方法检测mDRA-6对Jurkat及U937 细胞caspase-8、caspase-10、caspase-3的激活改变;免疫沉淀方法分析mDRA-6诱导的Jurkat及U937细胞DISC的caspase-8、caspase-10分子;定量-PCR检测Jurkat、U937细胞caspase-8、caspase-10 mRNA表达.MTT法检测caspase-8、caspase-10和caspase-3抑制剂对mDRA-6抑制Jurkat及U937细胞生长增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测caspase-8、caspase-10抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡作用的影响;结果:Western blot检测显示,mDRA-6作用Jurkat细胞,导致细胞caspase-8分子激活降解,但对caspase-10无激活改变;mDRA-6作用U937细胞,激活细胞caspase-10分子,但对caspase-8无激活表现;mDRA-6作用Jurkat和U937细胞,caspase-3及PARP均表现出激活降解.免疫沉淀检测发现,mDRA-6作用白血病细胞4h,Jurkat细胞DISC的caspase-8条带明显,caspase-10条带无明显显示;相反,U937细胞DISC的caspase-10条带出现,而caspase-8无明显条带显示.定量-PCR检测发现,Jurkat和U937细胞 caspase-8 mRNA表达无明显差异,但U937细胞 caspase-10 mRNA表达水平明显高于Jurkat细胞(P<0.01).预先使用caspase-8、caspase-10、caspase-3抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致的Jurkat细胞生长抑制率分别降低了72.94%(t=20.27,P＜0.01)、8.09%(t=1.82,P＞0.05)和31.20%(t=8.06,P＜0.01) mDRA-6所致U937细胞生长抑制率分别降低了4.53%(t=0.90,P＞0.05)、69.09%(t=17.25,P＜0.01)和50.20%(t=13.06,P＜0.01).AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测发现,预先使用caspase-8、10抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡率分别降低了80.82%和8.34% mDRA-6诱导的U937细胞凋亡率分别降低2.50%和48.47%.结论:mDRA-6激活不同起始caspase诱导细胞凋亡,激活caspase-8启动Jurkat细胞凋亡,激活caspase-10启动U937细胞凋亡;U937细胞caspase-10激活可能与细胞caspase-10 mRNA高表达有关.

关键词：凋亡、死亡受体5、单克隆抗体、半胱天冬酶、Jurkat细胞、U937细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R392

资助基金：国家"重大新药创制"科技重大专项2011ZX09506-004

在线出版日期：2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1299-1305