NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

摘要：

目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性.方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中；使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA；使用lipofectamine 2000转染试剂将重组质粒或空质粒和miR-34a inhibitor或control真核表达载体共转染HEK293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果:得到含NOTCH1基因3'-UTR(1 648 bp)序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证.NOTCH1基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点；用重组质粒和miR-34a inhibitor共转染的HEK293T组的荧光素酶活性比空质粒组高45％.结论:含NOTCH1基因3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功,miR-34a对NOTCH1基因有调控作用.

关键词：NOTCH1、微小RNA、3’非编码区、双荧光素酶报告载体、基因调控、基因转染

所属期刊栏目：29

分类号：R392.4

在线出版日期：2013-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：312-316