抗人IL-1β单链抗体的构建及其中和活性的检测

摘要：

目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础.方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27 b-A-hIL-1β-scFv.将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白.利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力.结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化.得到纯度为72.05％、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白.ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力.MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖.结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础.

关键词：hIL-1β、单链抗体、包涵体复性、中和活性、MTT

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分类号：R392.4

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31001084;黑龙江省博士后科研启动基金项目LBH-Q09162;黑龙江省教育厅科学技术研究项目12521z004;哈尔滨市科技创新人才发展计划资助2006RFXXS002;东北农业大学创新团队发展计划资助2007年

在线出版日期：2013-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：304-308,311