重组IL-12表达载体构建及对妊娠期哮喘小鼠气道炎症的调节与免疫应答影响

摘要：

目的:构建携带IL-12重组基因的真核表达载体,探讨其对妊娠期哮喘小鼠气道炎症的免疫调节作用及其可能机制.方法:PCR扩增mIL-12基因cDNA,利用DNA重组技术将线性化片段定向插入载体pcDNA3.1(+)质粒中,经酶切和测序鉴定,通过脂质体介导瞬时转染P815细胞,观察荧光蛋白在细胞中的表达和定位.以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立妊娠期哮喘小鼠模型,通过气道内灌注:妊娠期哮喘(AP)+ pcDNA3.1(+)-mIL-12组(AP1组)、单纯哮喘(ANP)+ pcD-NA3.1(+)-mIL-12组(ANP1组)给予50μl pcDNA3.1(+)-mIL-12/脂质体混合液；AP+ pcDNA3.1(+)组(AP2组)、ANP+pcDNA3.1(+)组(ANP2组)给予50μl pcDNA3.1(+)/脂质体混合液；单纯妊娠组(HP组)、阴性对照组(HNP组)给予50μlPBS.于末次激发24小时后,观察肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞计数及肺组织HE染色以评价小鼠气道炎症程度；RT-PCR、Western blot鉴定小鼠肺组织匀浆中IL-12蛋白及mRNA表达；流式细胞术检测小鼠脾细胞IL-17+及IFN-γ+分泌水平；ELISA测定小鼠外周血上清中细胞因子含量变化.结果:成功构建重组pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达载体,并在P815细胞中获得高效表达.与HP、HNP组相比,AP1、ANP1组BALF中白细胞总数及Eos,Neu,Lym占细胞总数百分比均显著低于AP2、ANP2组,但高于HP和HNP组,AP1与ANP1组间尤以AP1组降低显著(P＜0.05),且肺组织炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应明显轻微.肺组织标本中,AP1、ANP1组IL-12蛋白含量及mRNA表达水平在重组质粒干预后显著高于AP2、ANP2组.脾组织标本中AP1、ANP1组IFN-γ+含量明显升高,而CD4+ IL-17+明显降低(P＜ 0.05)；IFN-γ+与CD4+ IL-17+比例高于AP2、ANP2组(P＜0.05)；此变化趋势AP1组比ANP1组更为明显(P ＜0.05)；HP组IFN-γ+及IL-17+含量变化与HNP组组间差异不显著.外周血上清中细胞因子检测结果AP1、ANP1组IFN-γ明显升高,IL-4、IL-17显著降低(P＜0.05).结论:构建的pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达载体能够在明显改善妊娠期哮喘小鼠气道炎症反应的同时上调IFN-γ表达,使Th2、Th17型细胞分化和增殖功能受抑,证实IL-12表达上调参与了妊娠期哮喘的发生发展.

关键词：白细胞介素12、妊娠、哮喘、辅助性T细胞17型、真核表达、免疫耐受

所属期刊栏目：29

分类号：R392.4

资助基金：国家自然科学基金资助项目81100441

在线出版日期：2013-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：271-278