粉尘螨变应原第10组分基因克隆表达及生物信息学分析

摘要：

目的:克隆粉尘螨变应原第10组分(Der f 10)基因并建立其原核表达体系.方法:提取粉尘螨总RNA,反转录后经套式PCR扩增出目的基因并克隆至pMD19-T载体测序,将测序正确的目的基因插入表达质粒pET28a,转化E.coli BL21 (DE3)用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白.结果:RT-PCR扩增获得Der f 10,琼脂糖凝胶电泳见一条约888 bp的条带,与参考序列(GenBank No.EU 106617)同源性高达99.8%.将pET28a(+)-Der f 10质粒转化宿主菌E.coli BL21,SDS-PAGE电泳时出现特异性条带,Western blot表明重组蛋白可与抗His-Tag Mab抗体结合.生物信息学软件预测获得的Der f 10重组体由295个氨基酸组成的疏水性蛋白,相对分子质量为34 233.1 Da,二级结构包括α-螺旋(91.86%)、延伸主链(1.36%)和无规卷曲(6.78%),含有5个原肌球蛋白模序分别位于84~101、120~140、145~173、175~198和231~256氨基酸处.结论:获得了Der f 10编码基因,成功建立其原核表达体系,为生产重组变应原用于临床诊断与治疗奠定基础.

关键词：粉尘螨、重组变应原、克隆、基因表达、生物信息学

所属期刊栏目：28

分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30660166,NSFC81001330;盐城市科技发展计划YK2008079;江苏省卫生厅招标课题 No.Z200914 、江苏省卫生职业技术教育研究立项课题J200907;江苏省"六大人才高峰"第六批项目资助

在线出版日期：2012-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：877-881