热带剥爪螨变应原Blot5的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

摘要：

目的:克隆热带剥爪螨主要变应原Blo t 5基因,表达纯化该蛋白,并检测其免疫活性.方法:提取热带剥爪螨总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Blo t 5编码基因,将其连入原核表达载体pET-19b,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 Star (DE3) pLysS,IPTG诱导表达后,通过Ni2+亲和层析纯化重组变应原Blo t 5.用Dot blot、Western blot和ELISA等方法检测重组变应原Blo t 5免疫活性.结果:Dot blot和Western blot结果表明重组变应原Blo t 5和热带剥爪螨粗提液都能和Blo t 5鼠单克隆抗体结合.重组变应原Blo t 5检测69份热带剥爪螨过敏患者血清和21份户尘螨过敏患者血清中的特异性IgE,阳性率分别为29.0%和33.3%.结论:表达和纯化了具有与天然蛋白相似的免疫活性的重组热带剥爪螨变应原Blo t 5,可用于热带剥爪螨变应原的标准化,为标准化抗原的临床特异性诊断与治疗奠定基础.

关键词：热带剥爪螨、重组变应原、Blot5、蛋白表达、IgE

所属期刊栏目：28

分类号：R392.8

资助基金：国家高技术研究发展计划项目2007AA02Z472;卫生行业科研专项项目20082001

在线出版日期：2012-10-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：690-694