人源Fab噬菌体抗体库的构建与抗精氨酸加压素抗体的筛选

摘要：

目的:构建人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗精氨酸加压素特异性抗体并进行初步鉴定.方法:从18位健康成人的外周血淋巴细胞,提取总RNA.利用RT-PCR扩增人Fab抗体基因片段,将其克隆至噬菌粒载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab噬菌体抗体库.以固相化的精氨酸加压素为靶抗原对抗体库进行五轮筛选后,随机挑取50个单克隆进行phage-ELISA检测,阳性克隆行DNA测序分析.结果:成功构建库容为2.4×108的噬菌体抗体库,从中筛选到6株阳性克隆能够与精氨酸加压素特异性结合,其中阳性值最高的C4克隆行DNA测序分析证实其重链属IgG亚类,轻链为λ链.结论:构建大容量人源天然Fab抗体库,从中获得了特异性抗精氨酸加压素人源Fab抗体片段,有望为临床上精氨酸加压素的快速检测技术的建立奠定基础.

关键词：精氨酸加压素、噬菌体抗体库、Fab段、筛选

所属期刊栏目：28

分类号：R392

资助基金：天津市自然科学基金资助项目10JCYBJC11900

在线出版日期：2012-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：146-149