小鼠IL-10重组慢病毒载体的构建和病毒包装

摘要：

目的:构建小鼠IL-10重组慢病毒表达载体并进行包装,为进一步研究IL-10基因修饰树突细胞在哮喘免疫耐受中的作用提供实验基础.方法:小鼠IL-10基因片段经PCR扩增后,与酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,获得PGC-LV-IL-10重组慢病毒并转化细菌感受态细胞.克隆菌落行PCR鉴定,对阳性的重组质粒进行测序并转入293T细胞,荧光显微镜下观察GFP表达并行Western blot鉴定.将重组质粒与慢病毒包装系统一同转染293T细胞进行病毒包装,Real-time定量PCR法检测病毒滴度.结果:DNA测序结果及Western blot鉴定证实成功构建小鼠IL-10重组慢病毒载体,对其进行包装后测定慢病毒滴度为2×108 TU/ml.结论:成功构建并包装小鼠IL-10重组慢病毒表达载体.

关键词：IL-10基因、慢病毒载体、免疫耐受

所属期刊栏目：27

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金项目资助30860105

在线出版日期：2011-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：540-544