过表达Rab7基因对LPS和Poly I:C活化的巨噬细胞RAW264.7中iNOS/NO的影响

摘要：

目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响.方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系.通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系.通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性.以LPS和Poly I:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化.结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高.Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖.Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS 和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复.结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系.Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达.该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础.

关键词：多聚胞苷酸、脂多糖、一氧化氮合酶、一氧化氮

所属期刊栏目：27

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30801001;内蒙古自然科学基金2010MS0513

在线出版日期：2011-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：497-501