花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

摘要：

目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性.方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序.将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性.结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性.

关键词：花生、过敏原、Ara h 8、克隆表达、纯化、免疫印迹

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分类号：R392.8

资助基金：文为国家自然科学基金30871752;深圳出入境检验检疫局科技计划项目SZ2008105;深圳市深港创新圈项目和深圳大学创新团队基金资助项目200904

在线出版日期：2011-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：352-355