MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白.方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序.将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经Amylose Resin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定.结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础.

关键词：黑色素瘤相关抗原-D4a、原核表达、纯化、融合蛋白

所属期刊栏目：26

分类号：R739.4(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30760055;广西省自然科学基金桂科自0728148及0832144;广西高发疾病研究创新性团队基金桂教人[2007-59]号;广西大型仪器协作共用网499-2007-078及666-2008-079

在线出版日期：2010-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：432-435,440