人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究

摘要：

目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应.方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR 扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500 μg/ml zeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3.采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定.Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率.结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig 10 ng/ml、IP-10 5 ng/ml及I-TAC 1 ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%.结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础.

关键词：CXCR3、趋化因子、基因转染、逆转录病毒、稳定表达

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

资助基金：科技部科技重大专项资助2009ZX09103-705

在线出版日期：2010-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：387-391