尘螨变应原Der f1植物表达载体的构建及表达

摘要：

目的:构建尘螨变应原Der f1植物表达载体并侵染烟草叶片表达.方法:从保存的含pET28a(+)-Der f1的甘油菌株中扩增Der f1基因,并克隆到质粒载体中,提取质粒,进行测序;以ClaⅠ、SalⅠ双酶切,将Der f1基因克隆到马铃薯X病毒(PVX)载体中,构建植物病毒表达载体;将PVX-Der f1转化脓杆菌,挑取Kan、Tet抗性阳性的菌株侵染烟草叶片进行蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定和分析.结果:经SDS-PAGE分析,有4株烟草叶片蛋白提取物在34Mr处有特异性蛋白条带;经Western blot进一步验证其变应原,结果显示,烟草叶片中获得的重组蛋白在34M_r处与阳性血清发生特异性结合,而与阴性血清并不发生结合.结论:成功构建了植物病毒表达载体PVX-Der f1并获得表达,为尘螨变应原Der f1的研究提供新思路.

关键词：尘螨、Der f1、马铃薯X病毒(PVX)、植物表达

所属期刊栏目：26

分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30860261;海南省自然科学基金807070

在线出版日期：2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：250-253