重组多肽酶联免疫吸附法检测抗LKM-1抗体的初步应用

摘要：

目的:制备人自身抗原细胞色素P4502D6(CYP2D6)257-351位氨基酸片段融合蛋白作为自身抗原,探讨ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性和特异性.方法:以肝脏的cDNA混合文库为模板作PCR,将PCR产物与真核表达载体pEGH共同转化酿酒酵母Y258,碱裂解法进行质粒制备,PCR扩增鉴定.表达载体构建成功后,在半乳糖的诱导下表达产生重组融合蛋白,经GST亲和层析法进行纯化后,免疫印迹法鉴定抗原性,ELISA检测抗LKM-1抗体阳性血清及部分其他结缔组织病患者血清中的抗LKM-1抗体.结果:重组融合蛋白在宿主菌中获得表达,免疫印迹法鉴定表明其能与标准抗LKM-1抗体阳性血清反应,而与正常血清、其他抗血清无反应.在26份抗LKM-1抗体阳性血清中,6份抗HCV抗体阳性血清用重组多肽ELISA检测有5份呈阳性,其余20份血清用重组多肽ELISA检测均呈阳性;20份其他结缔组织病患者血清用重组多肽ELISA检测均为阴性.结论:重组的257-351位氨基酸片段是CYP2D6抗原的主要抗原表位区域,以重组多肽为基质ELISA检测抗LKM-1抗体的敏感性较高,为进一步研究抗体水平与临床病情变化的相关性奠定了基础.

关键词：重组、表位、抗LKM-1抗体、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：24

分类号：R593.2(全身性疾病)

在线出版日期：2010-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1021-1024,1027