RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达
目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础.方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析.以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析.结果:经Acc 65Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%.结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础.
PADI-4基因、SiRNA、RNA干扰、HL-60细胞系
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R3(基础医学)
上海市卫生局科技发展基金项目044100
2010-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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972-975
