共刺激分子配体B7-DC基因真核表达载体和转基因细胞的构建

摘要：

目的:克隆小鼠B7-DC基因,并构建含该基因的真核表达载体pEF6/-B7-DG-V5His,证明该基因在CHO细胞中的表达方式,为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础.方法:从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-DC编码区片段.按常规方法克隆进pEF6V5His载体中,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48小时后进行间接免疫荧光实验,72小时后用blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-DC的细胞株.结果:已成功克隆小鼠B7-DC基因并构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体,经间接免疫荧光实验(IFA)证明,该基因在CHO细胞中得到表达.经Western blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-DC基因.结论:构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,并能在CHO细胞中稳定表达目的基因,为该基因功能的后续研究奠定了基础.

关键词：共刺激分子、B7-DC、真核表达

所属期刊栏目：22

分类号：R392-33

资助基金：国家科技攻关项目2001BA70113

在线出版日期：2006-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：933-936