hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化

摘要：

目的:构建带有6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒,在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达.方法:利用高效真核表达载体phCMV1, 构建phCMV1-6His-hCGβ和phCMV1-6His-hCGβ-C3d3,脂质体法转染CHO细胞,G418(800μg/ml)筛选抗性克隆.放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量,Western blotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ-C3d3融合蛋白.用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物.结果:酶切及测序结果显示,phCMV1-6His-hCGβ及phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确.在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达,phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的1.6倍.表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白.结论:hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ-C3d3融合蛋白免疫动物的体液免疫效应和抗生育效果奠定了基础.

关键词：hCGβ、hCGβ-C3d3、6His、CHO、phCMV1

所属期刊栏目：20

分类号：R392-33

资助基金：上海市自然科学基金00ZB14058;高等学校博士学科点专项科研项目9941;卫生部优秀青年人才科研项目97031;国家自然科学基金30271235;国家重点实验室基金B2-02-1

在线出版日期：2004-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：743-747