微板酶联夹心杂交法定量检测人IL-18 mRNA

摘要：

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-18 mRNA.方法:针对人IL-18 mRNA RT-PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5'端为氨基修饰,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被在微孔板内;另一条为检测探针,3'端标记生物素.提取人外周血单个核细胞中总RNA, 进行RT-PCR扩增IL-18 mRNA,产物热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,再加入检测探针与已杂交的产物结合,最后经亲和素-辣根过氧化物酶(SAV-HRP)系统检测杂交信号.结果:该法检测IL-18 mRNA RT-PCR产物的灵敏度明显高于琼脂糖凝胶电泳,重复性良好,且结果数据化.结论:该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点,适合于PCR扩增产物的定量检测.

关键词：酶联夹心杂交、逆转录-聚合酶链反应、白细胞介素-18

所属期刊栏目：19

分类号：R392.11;R446.61

资助基金：浙江省医药卫生科技计划2001ZD007;浙江省温州市科技计划S2001A21

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：499-501