中国版纳猪MHCI类P1分子全长的原核表达与纯化

摘要：

目的:获得原核表达的中国版纳猪SIAI类P1蛋白质分子.方法:PCR扩增去信号肽的SIAl类P1 cDNA序列,亚克隆至pCEMT载体,测序.将亚克隆的P1 cDNA片段插入表达载体pET42b(+),构建重组表达质粒pET-42b(+)/sla-p1,转化E-coli表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,IFIG诱导P1-8×his融合蛋白表达,经包涵体洗涤,8mol/L尿素变性溶解,Ni2+亲和层析,梯度透析后,定量保存.SDS-PAGE、western-blotting鉴定目的蛋白的表达与纯化.结果:目的蛋白(分子量39.5 kD)表达量占细菌总蛋白15%,每升表达菌获得纯度95%的目的蛋白40mg～60mg.结论:成功建立猪SLA分子全长原核表达、纯化体系,为建立间接识别猪移植抗原SLAI类分子的人T细胞系及表位分析打下基础.

关键词：版纳猪、猪白细胞抗原、大肠杆菌、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：18

分类号：P392.11

资助基金：国家自然科学基金39993430-2

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：264-267