人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究
目的：研究人Flt-1胞外区2-3loop cDNA在Pichia.pastoris酵母中的表达，获得高 效 表达的具有生物学活性的重组Flt-1(2-3)。方法：采用PCR扩增 Flt-1(2-3)基因，经DNA序列 分析后，插入含AOX1 启动子和α分泌信号肽序列的Pichia.pastoris酵母表达载体中，构 建 重组质粒pPIC9K/Flt-1(2-3)，转化酵母宿主菌GS115，筛选His+Muts表型转化子，摇 瓶培养 ，1%甲醇诱导表达。表达产物经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-100分子 筛 层析纯化后，测定其生物学活性。结果：SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子形式存 在于上清中，诱导4 d的表达量达上清总蛋白的60%以上。ELISA及Western blot实验表明， 表 达产物具有良好的抗原性和特异性。经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-1 00 分子筛层析纯化后，Flt-1(2-3)纯度达到90%以上。生物学活性检测证实其具有结合hVEGF 16 5的能力和抑制hVEGF165对HUVEC的促增殖功能。结论： 获得了具有生物学活性的可溶性重组F lt-1受体胞外区2-3loop小片段，为进一步的动物实验和临床应用打下了基础。
血管内皮生长因子、Flt-1、毕赤巴斯德酵母、基因表达
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R392.12
国家高技术研究发展计划863计划102-08-01-03;广东省自然科学基金001098
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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