10.3969/j.issn.1672-3635.2002.05.001
马铃薯X病毒外壳蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建
将来源于国际马铃薯中心(International Potato Center,CIP)PVX病毒毒源接种至烟草上,对表现明显症状的烟草叶片提取马铃薯病毒X(PVX)总RNA,人工合成引物P1、P2,通过RT-PCR扩增合成PVX-cp的cDNA,井将其克隆到pGEM-T载体上.经限制酶谱分析后进行全序列测定,结果表明:该基因由714个核苷酸组成,编码238个氨基酸,与文献(分别来源于亚洲、非洲和欧洲)报道的4个pVX-cp基因相比同源性为81%~95%,其编码的氨基酸同源性均在90%以上.说明PVX-cp具有较高的保守性.用内切酶将PVX-cp基因自克隆载体pGEM切下,定向插入到表达质粒pBV220的启动子Pr、Pl的下游,构建了该基因的原核表达载体pBV-pyx,为进行该基因的原核表达和抗血清的制备奠定了基础.
马铃薯X病毒、外壳蛋白基因、RT-PCR、序列分析
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S532(薯类作物)
引进国际先进农业科技计划948计划省99-05
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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259-262