高分辨率熔解曲线分析检测家蝇cyp6d1基因突变

摘要：

目的 探讨家蝇溴氰菊酯抗性机制.方法 使用高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析与半分析定量PCR相结合的方法,分析家蝇抗性基因cyp6d1突变和扩增情况.通过对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性.结果 与敏感品系相比,抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量显著增加(P=0.0002),抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量是敏感品系的50.7倍;使用HRM对cyp6d1进行突变分析,将其分为3种基因型,分别为A型(Tm=85.5℃)、B型(Tm=87.3℃)和C型(Tm=88.5℃);经测序,该HRM分析结果分别与3类基因序列型相对应.A型基因型为纯合的1087G、1101T和1155A(对应GenBank序列号U22367.1);C型基因型为纯合的1087A、1101G和1155G;B型基因型为A型和C型的杂合型.生物信息学分析表明,该突变为无意义突变.结论杭州市家蝇抗性品系cyp6d1基因mRNA表达量显著增加,可能是家蝇抗性增加的原因之一.

关键词：高分辨率熔解曲线、家蝇、抗性、基因突变、cyp6d1

所属期刊栏目：23

分类号：R384.2;S481+.4(医学寄生虫学)

资助基金：浙江省卫生厅科研项目2009A176

在线出版日期：2013-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：499-502