miR-181-5p靶向PTEN/AKT/mTOR通路对氧化应激诱导下人皮肤成纤维细胞自噬及老化的影响

摘要：

目的 探讨miR-181-5p靶向10 号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对氧化应激诱导下人皮肤成纤维(HDF)细胞自噬及老化的影响.方法 以HDF细胞为研究对象,利用不同浓度H2 O2(0、100、200、500 μmol/L)处理细胞,通过CCK-8 法检测细胞存活率,确定构建细胞老化模型的适宜H2 O2 浓度,并将该浓度H2 O2 诱导的HDF细胞命名为H2 O2 模型细胞;双荧光素酶报告基因实验验证miR-181-5p与PTEN的靶向关系;利用Lipofectamine2000 试剂盒对H2 O2 模型细胞进行转染,细胞分组为:空白组(细胞未转染)、miR-181-5p mimics组、miR-NC组、anti-miR-181-5p组、anti-miR-NC组;荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-181-5p表达水平;Western印迹检测细胞中PTEN/AKT/mTOR通路相关蛋白、自噬相关蛋白(Beclin)-1、微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/Ⅰ表达水平;β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)试剂盒观察各组细胞形态及SA-β-gal染色阳性比例.结果 随着H2 O2 浓度的升高,HDF细胞存活率逐渐降低,有统计学差异(P<0.05),H2 O2 浓度为200 μmol/L时,细胞存活率为51.64%,所以选择200 μmol/L H2 O2作为适宜诱导浓度;与HDF细胞相比,H2 O2 模型细胞中miR-181-5p、磷酸化(p)-AKT、p-mTOR蛋白表达明显上调,PTEN蛋白表达明显下调(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实PTEN和miR-181-5p存在靶向关系;与空白组和miR-NC组比较,miR-181-5p mimics组中miR-181-5p、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显上调,PTEN、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05),细胞排列不规则、变大,轮廓不清楚,折光性差等老化状态更加明显,SA-β-gal染色阳性率显著升高(P<0.05);与空白组和anti-miR-NC组比较,anti-miR-181-5p组中miR-181-5p、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显下调,PTEN、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05),大多数细胞呈长梭形,轮廓清晰,折光性好,且SA-β-gal染色阳性率显著降低(P<0.05).结论 抑制miR-181-5p可能通过靶向上调PTEN蛋白表达,抑制AKT/mTOR通路,促进细胞自噬,进而延缓氧化应激诱导下HDF细胞老化.

关键词：氧化应激、miR-181-5p、10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路、自噬

所属期刊栏目：43

分类号：R758.1(皮肤病学与性病学)

资助基金：武汉市医学科研项目No.WX20Q03

在线出版日期：2023-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4538-4542