10.3969/j.issn.1005-9202.2023.14.048
HIF-1α诱导m6A阅读蛋白YTHDF1表达对缺氧复氧诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响
目的 探究缺氧诱导因子(HIF)-1α对缺氧/复氧(H/R)诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响及可能的作用机制.方法 体外培养小鼠心肌细胞,分为对照组、H/R组、pcDNA3.1-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α的阴性对照转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达组(pcDNA3.1-HIF-1α转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA阴性对照共转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-YTHDF1 组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA共转染至心肌细胞),转染48h后采用缺氧24h复氧6h的方法建立H/R模型.实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中HIF-1α和YTHDF1 mRNA表达;CCK-8 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTn)I、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)水平;自噬双标腺病毒mCherry-GFP-LC3B免疫荧光法检测心肌细胞自噬;Western印迹检测心肌细胞HIF-1α、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1 及自噬相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,H/R组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1 的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、微管相关蛋白1 轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、自噬相关蛋白2 同源物A(ATG2A)、自噬相关蛋白(ATG)14 表达显著增加,心肌细胞活力显著降低,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著升高(均P<0.05);与H/R组相比,HIF-1α过表达组和HIF-1α过表达+si-NC组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1 的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、ATG2A、ATG14 表达显著增加,心肌细胞活力显著升高,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著降低(均P<0.05);而在HIF-1α过表达基础上使用YTHDF1 siRNA转染心肌细胞下调YTHDF1 的表达后,HIF-1α过表达对心肌细胞增殖、自噬的促进作用及对细胞凋亡的抑制作用被明显减弱.结论 在缺氧条件下,HIF-1α可能通过上调YTHDF1 表达,促进H/R诱导的小鼠心肌细胞自噬.
缺氧诱导因子-1α、心肌细胞、YTH结构域家族蛋白1、自噬、缺氧/复氧
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R542.2(心脏、血管(循环系)疾病)
新疆生产建设兵团第八师石河子市科技计划项目;兵团财政科技计划项目
2023-08-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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