10.3969/j.issn.1005-9202.2023.14.046
基于细胞自噬JNK信号通路探讨通络糖泰方对高糖环境下大鼠雪旺细胞的影响
目的 探讨通络糖泰方对高糖环境下大鼠雪旺细胞自噬相关蛋白的影响,基于c-JUN氨基末端蛋白激酶(JNK)/自噬关键分子酵母Atg6 同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1 轻链3(LC3Ⅱ)阐明其分子机制.方法 30 只SD雄性大鼠制备含药血清,采用50 mmol/L的葡萄糖雪旺细胞培养基制备高糖雪旺细胞模型,实验分为6 组:空白组(5.6 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、模型组(50 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、甲钴胺片(弥可保)组(50 mmol/L葡萄糖+10%弥可保含药血清)、低剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+5%通络糖泰血清)、中剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+10%通络糖泰血清)和高剂量通络组(50 mmol/L葡萄糖+20%通络糖泰血清).细胞增殖与活性检测法(CCK-8)观察不同时段各组雪旺细胞活性,流式细胞术(FCM)检测各组雪旺细胞凋亡百分比,细胞自噬荧光染色法观察各组雪旺细胞自噬,Western印迹法检测各组雪旺细胞p-JNK、Beclin1 和LC3Ⅱ蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组雪旺细胞JNK、Beclin1 和LC3ⅡmRNA表达水平.结果 与空白组比较,模型组雪旺细胞活性显著降低(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),细胞自噬泡形成显著减少(P<0.01),p-JNK蛋白和mRNA表达显著升高、Beclin1 和LC3Ⅱ蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,弥可保组和高剂量通络组细胞活力明显增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01),自噬泡形成明显增多(P<0.01),p-JNK蛋白和mR-NA表达升高、Beclin1 和LC3Ⅱ蛋白和mRNA表达降低(P<0.05).结论 通络糖泰方能抑制高糖环境下JNK信号通路的异常激活,提高雪旺细胞自噬活性,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控JNK/Beclin1/LC3Ⅱ信号通路有关.
通络糖泰方、自噬、雪旺细胞、糖尿病周围神经病变
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R285.5(中药学)
四川省科技厅科研基金项目;成都中医药大学附属医院科技发展基金项目
2023-08-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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