通过CRISPR/Cas9敲除PD-1有效增强EGFR-CAR-T细胞对肺癌的抗肿瘤活性

摘要：

目的 探索基于规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR关联蛋白质(Cas)9 敲除程序性死亡受体(PD)-1 的靶向表皮生长因子受体(EGFR)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞是否可以有效抑制肺癌的进展.方法 通过慢病毒感染获得CAR-T细胞,并通过电转引导RNA(gRNA)及Cas9 蛋白敲除PD-1;流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率、肿瘤细胞表面EGFR表达、与靶细胞共孵育后CAR-T细胞中PD-1 表达及肿瘤浸润T细胞的比例;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测CAR-T细胞对靶细胞的细胞毒性;免疫缺陷鼠移植瘤模型检测体内抑瘤能力;免疫组化法检测肿瘤组织中PD-1 表达;结果 CAR-T细胞的阳性率均超过 40%;肿瘤细胞中NCI-H23 及A549 高表达EGFR,NCI-H1650 低表达EGFR,HCC827 不表达EGFR;CAR-T及PD-1-CAR-T细胞均可以以抗原依赖的方式杀伤肿瘤细胞,且PD-1-CAR-T细胞的杀伤活性较CAR-T细胞更强(P＜0.05);此外,PD-1-CAR-T细胞与靶细胞共孵育后PD-1 细胞比例更低(P＜0.01);PD-1-CAR-T细胞的体内抑瘤能力更强,且可以更显著地延长小鼠生存期;PD-1-CAR-T细胞在肿瘤中的增殖水平更高(P＜0.001),且PD-1-CAR-T组肿瘤中PD-1 细胞数更低(P＜0.001).结论 CRISPR/Cas9 介导的PD-1 敲除可以在体外和体内改善CAR-T细胞的效应功能,增强其对肺癌的抑制活性.

关键词：肺癌、CAR-T细胞、表皮生长因子受体(EGFR)、程序性死亡受体(PD)-1、CRISPR/cas9

所属期刊栏目：43

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：河北省医学科学研究课题;张家口市科技计划

在线出版日期：2023-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3483-3487