miR-335-3p靶向调控CCL5在TNF-α诱导椎间盘退变中相关机制

摘要：

目的 探讨在炎性激活条件下的椎间盘退变(IDD)过程中miR-335-3p靶向调控趋化因子配体(CCL)5 的机制及可能抑制IDD进展的方法.方法 建立人髓核(NP)细胞的原代培养,肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导NP细胞,Trizol法获取NP细胞总RNA,随后对mRNA及miRNA进行高通量测序分析.对miR-335-3p靶向结合mRNA进行预测,结合STRING富集分析miRNA靶标基因,确定TNF-α影响NP细胞的关键基因.应用The Human Protein Atlas(https://www.proteinatlas.org/)分析CCL5 及其下游调控蛋白受体趋化因子受体(CCR)5 基因在免疫相关细胞中的表达水平.应用Targetscan预测miR-335-3p与CCL5 3'UTR序列的靶向结合位点.结合promega的双荧光素酶报告系统使用turner仪器进行测量.将人NP细胞分成:Control组(NP细胞)、TNF-α组、mimic-NC组、miR-335-3p mimic组.使用Lipofectamine RNAiMAX将miR-335-3p mimic或miR-NC寡核苷酸序列转染入人NP细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miR-335-3p的表达情况.Western印迹实验检测NP细胞外基质相关蛋白的表达水平.结果 与Control组比较,TNF-α组miR-335-3p基因表达水平显著下调(P＜0.01),CCL5 基因表达水平显著上调(P＜0.01);miR-335-3p mimic组miR-335-3p表达水平较mimic-NC组显著上调(P＜0.01),CCL5 表达水平显著较mimic-NC组下调(P＜0.01).与Control组比较,TNF-α组生长分化因子(GDF)5 和性别决定区Y框蛋白(SOX)9 蛋白显著下调,而基质金属蛋白酶(MMP)2 蛋白表达水平显著上调(P＜0.01);与mimic-NC组比较,miR-335-3p mimic组MMP2 蛋白表达水平显著下调,而GDF5 和SOX9 蛋白显著上调(P＜0.01).结论 miR-335-3p在TNF-α诱导的炎症条件下可特异性下调CCL5,从而逆转TNF-α诱导的软骨生成因子SOX9 的异常表达.

关键词：椎间盘退变、炎症、miR-335-3p、趋化因子配体(CCL)5/趋化因子受体(CCR)5、肿瘤坏死因子(TNF)-α

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分类号：R681.55(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：吉林省科技厅自然科学基金项目20200201363JC

在线出版日期：2023-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2956-2961