10.3969/j.issn.1005-9202.2022.22.046
同型半胱氨酸通过miR-21靶向CDC25A介导细胞周期阻滞
目的 研究miR-21在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的作用和潜在机制.方法 流式细胞术检测不同浓度Hcy处理HUVECs后细胞凋亡和细胞周期的变化;运用RT-qPCR检测15个miRNA和15个miR-21靶基因的表达水平;用荧光素酶检测和Western印迹检测miR-21对细胞周期调控因子(CDC25A)表达的作用;用流式细胞术揭示慢病毒诱导CDC25A过表达和miR-21 mimic对细胞周期进程的影响.结果 与0 mmol/L Hcy相比,3 mmol/L Hcy组、5 mmol/L Hcy组细胞数量显著减少,细胞增殖显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增加(P<0.05),细胞中的B细胞淋巴瘤(Bcl)-2 mRNA和蛋白水平以剂量依赖的方式显著降低(P<0.05).与0 mmol/L Hcy组相比,3 mmol/L Hcy组miRNA-21表达水平显著上升(P<0.05),CDC25A表达水平显著下降(P<0.05).与NC组相比,miR-21-5p mimic组miR-21-5p水平显著升高,CDC25A mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01).与miR-21-5p mimic组相比,miR-21-5p inhibitor组miR-21-5p水平显著降低(P<0.01).双荧光霉素报告实验结果发现实验组miR-21-5p mimic显著抑制含有野生型CDC25A 3'-UTR细胞的荧光素酶活性(P<0.01).与0 mmol/L Hcy组,3 mmol/L Hcy组CDC25A蛋白表达水平显著下调(P<0.05).与空白对照组相比,CDC25A慢病毒组细胞中CDC25A蛋白水平显著上升,CDC25A慢病毒+miR-21 mimic组CDC25A的蛋白表达显著减少(P<0.05).与空白对照组相比,CDC25A慢病毒组细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),细胞恢复进入S期,CDC25A慢病毒+miR-21 mimic组降低了CDC25A过表达对细胞周期进程的影响(P<0.05).结论 miR-21通过靶向Hcy诱导细胞中的CDC25A,在调控细胞周期进展和细胞增殖中发挥重要作用,为阻止Hcy导致的细胞功能障碍性疾病提供新的治疗思路.
同型半胱氨酸、miR-21、CDC25A、细胞周期、细胞增殖
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R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金81570208
2022-11-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共9页
5558-5566